午时花图片 午时花图片 ,欧美艳星介绍 欧美艳星介绍 ,范冰冰和谁睡过 范冰冰和谁睡过

发布日期:2021年11月28日
您好,欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
| EN
--> 400-6111-883
COVID-19 solution
首页 > COVID-19 solution > Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

Hifair® V Reverse Transcriptase 第代耐热逆转录酶

11300.jpg

产品信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES92

10000 U

1623.00

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES93

50000 U

5623.00


产品描述


Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。


产品组分


午时花图片 午时花图片 ,欧美艳星介绍 欧美艳星介绍 ,范冰冰和谁睡过 范冰冰和谁睡过 编号

组分

产品编号/规格

11300ES92 (10000 U)

11300ES93 (50000 U)

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

11300-B

5×Hifair® V Buffer

250 μL

1.25 mL


产品应用


一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。


活性定义


以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


质量控制


核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测:200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA,37℃下孵育1 h,RNA电泳谱带不发生变化。


运输与保存方法


冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


注意事项


1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


第一链cDNA合成操作步骤


1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

午时花图片 午时花图片 ,欧美艳星介绍 欧美艳星介绍 ,范冰冰和谁睡过 范冰冰和谁睡过

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL午时花图片 午时花图片 ,欧美艳星介绍 欧美艳星介绍 ,范冰冰和谁睡过 范冰冰和谁睡过

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


相关产品


午时花图片 午时花图片 ,欧美艳星介绍 欧美艳星介绍 ,范冰冰和谁睡过 范冰冰和谁睡过

产品名称

货号

规格

(元)

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05/10

2/10 KU

216/916

Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase(配体法热启动DNA聚合酶)

10110ES72/80

250/1000 U

186/636

Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase(抗体法热启动Taq酶)

10113ES60/76

100/500 U

216/656

Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

11205ES08

5 mL

740

Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix

11208ES08

5 mL

5565

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60/76

100/500 U

683/3083

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72/80

0.25/1 mL

253/853

dNTP Mix (25 mM each)

10125ES72/80

0.25/1 mL

116/353

HB200221